বিক্রি করা প্রায় সব কোম্পানি আছেব্রোমেলেন এনজাইম পাউডারপ্যাপেইনের সাথে মিশ্রিত হয়। ব্রোমেলেনকে 5000GDU/g পর্যন্ত বিশুদ্ধ করা কঠিন। কিন্তু প্যাপেইনকে 1000,000GDU/g এ বিশুদ্ধ করা খুব সহজ। এমনকি 2000,000GDU/g পর্যন্ত। কিন্তু ব্রোমেলাইনের কার্যকারিতা প্যাপেইনের থেকে আলাদা। জাল পণ্য এবং সত্যিকারের পণ্যের সাথে রঙ, সুগন্ধি, জলের দ্রবণীয়তা এবং স্বাদের বৈপরীত্য। সঠিক ব্রোমেলেন এনজাইম পাউডার ধূসর, গন্ধহীন, স্বাদহীন এবং পানিতে অদ্রবণীয়।
কিন্তু মিথ্যা ব্রোমেলেনের নিম্নলিখিত বৈশিষ্ট্য রয়েছে:
● এটি হালকা-হলুদ, সুগন্ধযুক্ত এবং হালকা মিষ্টি এবং জলে দ্রবণীয়। এটি পাপাইনের বৈশিষ্ট্য।
● এটি প্রদাহ কমাতে এবং ব্যথা উপশম করতে ব্যবহৃত হয়। কিন্তু প্যাপেইনে এই ফাংশনগুলো প্রায় নেই।
● এটি শুধুমাত্র খাদ্যতালিকাগত পরিপূরক হিসাবে ব্যবহৃত হয়, খাদ্য সংযোজনকারী নয়, তবে প্রকৃতপক্ষে ফার্মা গ্রেড হতে পারে। কিন্তু পাপেইন শুধুমাত্র মাংসের টেন্ডারাইজার পাউডার এবং প্রসাধনী হিসাবে ব্যবহৃত হয়।
আমরা SDS-PAGE জেল এবং GELATIN DIGESTION UNIT ANALYTICAL এবং HPLC পদ্ধতি অনুসারে ব্রোমেলেন পরীক্ষা করেছি, জাল পণ্যের জন্য SDS-PAGE জেল পদ্ধতিতে কম লক্ষ্য অণু রয়েছে।
নিম্নলিখিত SDS পৃষ্ঠা ইলেক্ট্রোফোরেসিস ফলাফল আছে
উপরের দাগটি দেখায় যে শুধুমাত্র সঠিক পণ্যটির ছবির সঠিক জায়গায় একই দাগ রয়েছে, তবে নকল পণ্যটিতে সামান্য দাগ রয়েছে, এর মানে আণবিক ওজন সবেমাত্র দৃশ্যমান।
ব্রোমেলাইনের আণবিক ওজন প্রায় 33000, কিন্তু পাপাইনের আণবিক ওজন 21000। এবং HPLC ক্রোমাটোগ্রাম:
আপনি দেখতে পাবেন যে শুধুমাত্র সঠিক নির্যাসে ব্রোমেলিনের সঠিক আণবিক ওজন রয়েছে এবং এটি HPLC দ্বারা সনাক্তযোগ্য।
কিন্তু যদি আমরা শুধুমাত্র জেলটিন ডাইজেশন ইউনিট অ্যানালিটিক্যাল মেথড (GDU) দ্বারা পরীক্ষা করি তাহলে Annex II দেখুন। সঠিক এবং মিথ্যা উভয় পণ্যেরই নীচের মত একই ফলাফল রয়েছে:
আনারস স্টেম খুব সস্তা, এবং স্টেম থেকে ব্রোমেলিনের হার খুবই কম, উত্পাদন প্রক্রিয়ায় কিছু দূষণ রয়েছে।
প্রায় সব ব্রোমেলেন এনজাইম পাউডার কারখানা মাঠের কাছাকাছি। তারা তাজা কান্ড ব্যবহার করে। দীর্ঘ দূরত্বে কান্ড পাঠানো অসম্ভব। ক্ষেত্র থেকে সংগ্রহ করার সময় কাঁচামাল যত তাড়াতাড়ি সম্ভব পরিচালনা করা উচিত বা প্রোটিনের ক্ষয় এড়াতে এটি একটি কম তাপমাত্রার পরিবেশে (4-8 ডিগ্রি) সংরক্ষণ করা উচিত। বাস্তব জীবনে, অনেকগুলি ডালপালা আনারসের কারণে প্রস্তুতকারক আসলে উপরের দুটি শর্তের কোনটি পূরণ করতে পারে না। যুক্তিসঙ্গত পদ্ধতি হল সময় এবং প্রোটিন কার্যকলাপ ক্ষতি পরিচালনার মধ্যে ভারসাম্য। সাধারণত, আনারস ফসল কাটার মৌসুমে অপরিশোধিত কাঁচামাল তৈরি করে এবং নিম্ন তাপমাত্রার পরিবেশে (4-8 ডিগ্রি) অপরিশোধিত কাঁচামাল সংরক্ষণ করে।
আমরা এসডিএস পৃষ্ঠা ইলেক্ট্রোফোরেসিস সম্পর্কে কিছু পরীক্ষা করছি, তাত্ত্বিকভাবে আমরা এটিকে 10,000 বা 20,000-এ উন্নীত করতে পারি৷ কিন্তু এটি খুব ব্যয়বহুল হবে৷ 5000GDU/g এবং এটিকে স্থিতিশীল করে মালটো সমর্থন/মাইক্রোএনক্যাপসুলেটেড এক বা অন্য কিছু প্লাস জৈব গ্রেড নিষ্কাশন/বিশুদ্ধকরণে।
অ্যানেক্স I
● পদ্ধতি 5 SDS polyacrylamide জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস (SDS-PAGE)
SDS-PAGE হল একটি denatured polyacrylamide জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস পদ্ধতি। এই পদ্ধতিতে প্রোটিন পৃথকীকরণের নীতিটি এই সত্যের উপর ভিত্তি করে যে বেশিরভাগ প্রোটিন অ্যানিওনিক সার্ফ্যাক্ট্যান্ট সোডিয়াম ডোডেসিল সালফেট (এসডিএস) এর সাথে ওজন অনুপাতে একত্রিত হয়ে একটি জটিল গঠন করতে পারে।
প্রোটিন অণু দ্বারা বাহিত ঋণাত্মক চার্জ প্রাকৃতিক প্রোটিন অণুর নিট চার্জকে ছাড়িয়ে যায়, যা বিভিন্ন প্রোটিন অণুর চার্জ প্রভাবকে দূর করে এবং তাদের আণবিক আকার অনুযায়ী প্রোটিনকে পৃথক করে।
এই পদ্ধতিটি গুণগত সনাক্তকরণ, বিশুদ্ধতা এবং অপবিত্রতা নিয়ন্ত্রণ এবং প্রোটিনের পরিমাণগত নির্ধারণের জন্য ব্যবহৃত হয়।
1 ইন্সট্রুমেন্ট ডিভাইস
ধ্রুবক ভোল্টেজ বা ধ্রুবক বর্তমান পাওয়ার সাপ্লাই, উল্লম্ব প্লেট ইলেক্ট্রোফোরেসিস ট্যাঙ্ক, এবং আঠালো তৈরি ছাঁচ।
2. বিকারক
(1) জল।
(2) সেপারেশন জেল বাফার (4x, দ্রবণ A) 1.5mol/L trihydroxymethyl aminomethane হাইড্রোক্লোরিক অ্যাসিড বাফার। 18.15 গ্রাম ট্রাইহাইড্রোক্সিমিথাইল অ্যামিনোমেথেন ওজন করুন এবং উপযুক্ত পরিমাণে জল দিয়ে দ্রবীভূত করুন। হাইড্রোক্লোরিক অ্যাসিড দিয়ে pH মান 88 এ সামঞ্জস্য করুন এবং জল দিয়ে 100ml পাতলা করুন।
(3) ওজন 58। অন্ধকার)।
(4) 10 শতাংশ এসডিএস দ্রবণে (সি দ্রবণ) 10 গ্রাম সোডিয়াম ডোডেসিল সালফেট ওজন করুন, জলে দ্রবীভূত করুন এবং 100 মিলি মিলি করে নিন
(5) tetramethylethylenediamine সমাধানের বাণিজ্যিকীকরণ বিকারক (TEMED, D সমাধান)।
10 শতাংশ অ্যামোনিয়াম পারসালফেট দ্রবণ (ই দ্রবণ) 10 গ্রাম অ্যামোনিয়াম পারসালফেট ওজন করে, জলে দ্রবীভূত হয় এবং 100 মিলি পাতলা করে। এটি ব্যবহারের আগে এটি প্রস্তুত করার বা 2 সপ্তাহের জন্য -20 ডিগ্রিতে আলাদাভাবে সংরক্ষণ করার পরামর্শ দেওয়া হয়।
(7) ঘনীভূত রাবার বাফার (4 ×, F সমাধান) 0.5mol/L Trihydroxymethylaminomethane হাইড্রোক্লোরিক অ্যাসিড বাফার, ওজন 6.05g Trihydroxymethylaminomethane, দ্রবীভূত করার জন্য উপযুক্ত পরিমাণে জল যোগ করুন, হাইড্রোক্লোরিক দিয়ে pH মান 6.8 এ সামঞ্জস্য করুন অ্যাসিড, এবং 100 মিলি জল দিয়ে পাতলা করুন।
(8) ইলেক্ট্রোড বাফার (10 ×) ওজনের 30 গ্রাম ট্রাইমেথাইলামিনোমেথেন, 144 গ্রাম গ্লাইসিন এবং 10 গ্রাম সোডিয়াম ডোডেসিল সালফেট, এগুলিকে জলে দ্রবীভূত করে প্রায় 800 মিলি করে পাতলা করে। হাইড্রোক্লোরিক অ্যাসিড দিয়ে pH মান 8৷{7}}.8 এ সামঞ্জস্য করুন এবং জল দিয়ে 1000ml পাতলা করুন৷
(9) নন-কমিত নমুনা বাফার (4 ×) ওজন 303 গ্রাম ট্রাইমেথাইলামিনোমেথেন, 20 মিলিগ্রাম ব্রোমোফেনল ব্লু, এবং 8.0 গ্রাম সোডিয়াম ডোডেসিল সালফেট, 40 মিলি গ্লিসারল পরিমাপ করে, জলে দ্রবীভূত করে এবং প্রায় 80 মিলি করে পাতলা করে। হাইড্রোক্লোরিক অ্যাসিড দিয়ে pH 68 এ সামঞ্জস্য করুন এবং জল দিয়ে 100ml পাতলা করুন।
(8) ইলেকট্রোড বাফার (10 ×) ওজনের 30 গ্রাম ট্রাইমেথাইলামিনোমেথেন, 144 গ্রাম গ্লাইসিন এবং 10 গ্রাম সোডিয়াম ডোডেসিল সালফেট, জলে দ্রবীভূত হয় এবং প্রায় 800 মিলি মিলিমিটারে পাতলা হয়। হাইড্রোক্লোরিক অ্যাসিড দিয়ে DH মানকে 81-88-এ সামঞ্জস্য করুন এবং জল দিয়ে 1000ml পাতলা করুন
(9) নন-কমিত নমুনা বাফার (4 ×) ওজন 3.03 গ্রাম ট্রাইমেথাইলামিনোমেথেন, 20 মিলিগ্রাম ব্রোমোফেনল ব্লু, এবং 80 গ্রাম সোডিয়াম ডোডেসিল সালফেট, 40 মিলি গ্লিসারল পরিমাপ করে, পানিতে দ্রবীভূত করে এবং প্রায় 80 মিলি পর্যন্ত পাতলা করে। হাইড্রোক্লোরিক অ্যাসিড দিয়ে pH 6.8 এ সামঞ্জস্য করুন এবং জল দিয়ে 100ml পাতলা করুন।
(10) হ্রাসকৃত পরীক্ষার পদার্থের বাফার (4 ×) ওজন 3.03 গ্রাম ট্রাইমেথাইলামিনোমেথেন, 20 মিলিগ্রাম ব্রোমোফেনল ব্লু, এবং 80 গ্রাম সোডিয়াম ডোডেসিল সালফেট, 40 মিলি গ্লিসারল পরিমাপ করে, দ্রবীভূত করে এবং পাতলা করে এবং প্রায় 80 মিলি জলে যোগ করে - 20মিলি মারকাপটোয়েথানল, হাইড্রোক্লোরিক অ্যাসিডের সাথে pH 6.8 এ সামঞ্জস্য করুন, 100 মিলি জল দিয়ে পাতলা করুন (বা 3.03 গ্রাম ট্রাইমেথাইলামিনোমেথেন, 20 মিলিগ্রাম ব্রোমোফেনল ব্লু, 8.0 গ্রাম সোডিয়াম ডোডেসিল সালফেট, 40 মিলি জলে ডাইসোলটেল এবং 40 মিলি জলে মিশ্রিত করুন 80ml করে, pH কে হাইড্রোক্লোরিক এসিড দিয়ে 6.8 এ সামঞ্জস্য করুন, পানি দিয়ে 100ml করে পাতলা করুন এবং ব্যবহারের আগে, dithiothreitol যোগ করুন 100mmol/L)।
● পরিশিষ্ট II
জেলটিন হজম ইউনিট বিশ্লেষণাত্মক পদ্ধতি (GDU)
A. উদ্দেশ্য: এই পদ্ধতিটি Bromelain এনজাইম পাউডারের প্রোটিওলাইটিক কার্যকলাপ নির্ধারণ করতে ব্যবহৃত হয়।
B. সরঞ্জাম:
1. pH মিটার
2. কনস্ট্যান্ট টেম্পারেচার ওয়াটার বাথ 45।{2}} ডিগ্রি ± 0.1 ডিগ্রি
3. বিশ্লেষণাত্মক ভারসাম্য
4. ভলিউমেট্রিক ফ্লাস্ক
5. ভলিউমেট্রিক পাইপেট
6. টাইমার
7. ডিজিটাল বুরেট (0.1 মিলি এর নির্ভুলতা)
8. ফিউম ফণা
9. স্বয়ংক্রিয় Pipetters
C. নিরাপত্তা সতর্কতা:
এই পরীক্ষাটি অবশ্যই ফিউম হুডে করা উচিত।
1. মানক পরীক্ষাগার নিরাপত্তা অনুশীলন ব্যবহার করুন.
2. ফর্মালডিহাইড: প্রস্তুত করুন এবং সর্বদা একটি ফিউম হুডে রাখুন। পরিচিত কার্সিনোজেন এবং টেরাটোজেন।
3. পারক্সাইড: শক্তিশালী অক্সিডাইজার
D. রিএজেন্ট এবং বিকারক প্রস্তুতি:
1. পাতিত জল: আনুমানিক 500 মিলি: 0.1 N HCI এর সাথে 4.5 এর pH এ সামঞ্জস্য করুন।
2. জেলটিন সাবস্ট্রেট:
ক 375 মিলি গরম জলে 25 গ্রাম জেলটিন (মাইক্রোবায়োলজি। 1.04070) দ্রবীভূত করুন, একটি ফোঁড়া আনুন। 45 ডিগ্রী পর্যন্ত ঠান্ডা।
খ. 0.1 N HCI দিয়ে pH 4.5 এ সামঞ্জস্য করুন এবং 500 ml pH 4.5 পাতিত জলে পাতলা করুন।
গ. জেলটিন স্তরটি 45 ডিগ্রিতে রাখুন।
3. বাফার সমাধান:
ক একটি 150 মিলি বিকারে 40-50 মিলি জলে ধীরে ধীরে 15 গ্রাম NaCl যোগ করুন এবং দ্রবীভূত করতে নাড়ুন।
খ. 0.570 মিলি অ্যাসিটিক অ্যাসিড যোগ করুন।
গ. 0.2N HCL দিয়ে pH 4.5 এ সামঞ্জস্য করুন (ভলিউম 100ml-এর বেশি হবে।)
4. 3 শতাংশ হাইড্রোজেন পারক্সাইড:
ক পিপেট 2.5 মিলি 30 শতাংশ হাইড্রোজেন পারক্সাইড (স্টক সলিউশন) একটি 25 মিলি ভলিউমেট্রিক ফ্লাস্কে এবং পিএইচ 4.5 পাতিত জল দিয়ে ভলিউম পর্যন্ত পাতলা করুন
5. 37 শতাংশ ফর্মালডিহাইড pH 9৷{3}}: a. ফর্মালডিহাইডের পর্যাপ্ত পরিমাণ (100 মিলি) 0.1 N NaOH-এর সাথে pH 9.0-এর সাথে সামঞ্জস্য করুন (pH সমন্বয়ের আগে প্রতি নমুনায় প্রায় 20 মিলি ফর্মালডিহাইড।)
জেলটিন হজম ইউনিট বিশ্লেষণাত্মক পদ্ধতি (GDU) - অব্যাহত।
6. 0.100 N NaOH: (প্রমাণিত ক্রয় করা) ক. স্টক সমাধান: 0.100 N এ প্রমিত
E. পদ্ধতি:
1. এনজাইম প্রস্তুতি:
ক এনজাইম প্রস্তুতি গণনা
ওজন {{0}}/লক্ষ্য কার্যকলাপ (প্রায় 0.05 গ্রাম বা 50 মিলিগ্রাম)
উ: এনজাইমটিকে 50 মিলি ভলিউমেট্রিক ফ্লাস্কে সঠিকভাবে ওজন করুন
B. 8.3 মিলি বাফার দ্রবণ যোগ করুন।
খ. ঘরের তাপমাত্রায় 30 মিনিটের জন্য দাঁড়াতে দিন।
C. pH 4.5 পাতিত জল ব্যবহার করে 50 মিলি পাতলা করুন, একটি ছোট নাড়ার বার যোগ করুন এবং অতিরিক্ত 10 থেকে 15 মিনিটের জন্য নাড়ুন
2. এনজাইম পদ্ধতি:
ক পিপেট 25 মিলি জেলটিন সাবস্ট্রেট প্রতিটি 100 মিলি বীকারের প্রতিটিতে নাড়ার বার রয়েছে এবং সেগুলিকে 45 ডিগ্রীতে 5 মিনিটের জন্য একটি ওয়াটার বাথ এ রাখুন, একটি টেস্ট সলিউশনের জন্য এবং অন্যটি ব্ল্যাঙ্ক সলিউশনের জন্য।
খ. পরীক্ষার সমাধান:
1) পরীক্ষার সমাধানের জন্য মনোনীত বীকারে ব্রোমেলেন এনজাইম পাউডার দ্রবণের 10 মিলি যোগ করুন, সময় শুরু করুন এবং ঘূর্ণায়মান করুন।
2) ঠিক 20 মিনিটের ইনকিউবেশনের পরে 45 ডিগ্রিতে, 0.1 মিলি 3 শতাংশ হাইড্রোজেন পারক্সাইড যোগ করুন এবং ঘূর্ণায়মান করুন।
3) অতিরিক্ত 5 মিনিটের জন্য ইনকিউবেট করুন।
4) জল স্নান থেকে বীকার সরান এবং ধ্রুবক নাড়তে pH প্রোব সন্নিবেশ করুন.
5) 10 সেকেন্ড পর পিএইচ রেকর্ড করুন (প্রাথমিক পিএইচ)
6) 0.1 N NaOH-এর সাথে pH 6৷{2}}-এর সাথে সামঞ্জস্য করুন৷ (প্রায় 2-4 মিলি)
*দ্রষ্টব্য: pH 6-এ সামঞ্জস্য করার সময়।{1}} pH 5.8-এ সতর্ক থাকুন; পিএইচ ধীরে ধীরে বৃদ্ধি পায় এবং এই সময়ে NaOH এর মিনিট যোগ করলে তা উল্লেখযোগ্যভাবে pH বৃদ্ধি করবে।
7) ক্রমাগত নাড়তে, 37 শতাংশ ফর্মালডিহাইড pH 9.0 এর 10 মিলি যোগ করুন।
8) 10 সেকেন্ড এবং 1 মিনিট পরে পিএইচ রেকর্ড করুন।
9) টাইট্রেট to pH 9৷{2}} সঙ্গে 0.1 N NaOH.
10) টাইট্রেশন ভলিউম রেকর্ড করুন।
এটি পরীক্ষার টাইটার, টি. সি.
ব্ল্যাঙ্ক সলিউশন: ব্ল্যাঙ্ক সলিউশন পরীক্ষা সলিউশনের সাথে একযোগে চালানো উচিত। টেস্ট সলিউশন শুরু হওয়ার 12 মিনিট পর ব্ল্যাঙ্ক সলিউশন নির্ধারণ শুরু করে এটি সম্পন্ন করা হয়। ব্ল্যাঙ্ক সলিউশনের সাথে এগিয়ে যাওয়ার আগে এটি আপনাকে টেস্ট সলিউশনের উপর অ্যাস সম্পূর্ণ করার জন্য সময় দেয়। 1) ফাঁকা দ্রবণ এবং ঘূর্ণনের জন্য মনোনীত বীকারে 3 শতাংশ হাইড্রোজেন পারক্সাইডের 0.1 মিলি যোগ করুন।
2) ঠিক 20 মিনিটের ইনকিউবেশনের পরে 45 ডিগ্রিতে 1.0 মিলি ব্রোমেলেন দ্রবণ যোগ করুন এবং ঘূর্ণায়মান করুন।
3) অতিরিক্ত 5 মিনিটের জন্য ইনকিউবেট করুন।
জেলটিন পরিপাক ইউনিট বিশ্লেষণী পদ্ধতি (GDU) - অব্যাহত।
4) জল স্নান থেকে বীকার সরান এবং ধ্রুবক নাড়তে pH প্রোব সন্নিবেশ করুন.
5) 10 সেকেন্ড পর পিএইচ রেকর্ড করুন (প্রাথমিক পিএইচ)
6) 0.1 N NaOH-এর সাথে pH 6৷{2}}-এর সাথে সামঞ্জস্য করুন৷ (প্রায় 2-4 মিলি)*উপরে নোট দেখুন।
7) ক্রমাগত নাড়তে, 37 শতাংশ ফর্মালডিহাইড pH 9.0 এর 10 মিলি যোগ করুন।
8) 10 সেকেন্ড এবং 1 মিনিট পরে পিএইচ রেকর্ড করুন।
9) টাইট্রেট to pH 9৷{2}} সঙ্গে 0.1 N NaOH.
10) টাইট্রেশন ভলিউম রেকর্ড করুন। এই ফাঁকা টাইটার, বি.
F. গণনা:
1. সংজ্ঞা: একটি জেলটিন হজম ইউনিট হল সেই পরিমাণ এনজাইম যা 45 ডিগ্রিতে 20 মিনিটের পরিপাক হওয়ার পরে, pH 4.5 বা pH 5.5 (GDU pH 4.5 বা pH 5.5) এ একটি সাধারণ জেলটিন দ্রবণ থেকে 1 মিলিগ্রাম অ্যামিনো নাইট্রোজেন মুক্তি পাবে।
GDU/g {{0}} (TB) x 14 x N x 50 Wt (g) কোথায়: T=টেস্ট টাইটার (ml 0.1 N NaOH) B=ফাঁকা টাইটার (ml 0.1 N NaOH) N=প্রমিত NaOH এর স্বাভাবিকতা (অর্থাৎ 0.100) Wt (g)=এনজাইমের প্রাথমিক ওজন
G. পরীক্ষার পরামিতি:
1. এনজাইম প্রস্তুতিগুলি প্রায় 0.001 গ্রাম/মিলি (1 মিলিগ্রাম/মিলি) ঘনত্বে বা ব্রোমেলেন এনজাইম পাউডারের জন্য প্রায় 1-2 GDU/ml ঘনত্বে পাতলা হয়। পদ্ধতির যথার্থতা নিশ্চিত করার জন্য প্রতিটি রানের সাথে একটি রেফারেন্স উপাদান পরীক্ষা করা হয়।
Guanjie GDU পরীক্ষা পদ্ধতি ব্যবহার করে বাল্ক ব্রোমেলেন পাউডার সরবরাহ করে। আমাদের উত্পাদন প্রক্রিয়া CGMP স্ট্যান্ডার্ড ওয়ার্কশপের অধীনে কাজ করে, দুটি কারখানা এবং দুটি স্বাধীন পরীক্ষাগারে তিনটি উত্পাদন লাইন ব্যবহার করে। আমাদের পণ্য সংক্রান্ত কোন অনুসন্ধানের জন্য, আমাদের সাথে যোগাযোগ করুনinfo@gybiotech.com.
